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植物高尔基体提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种新鲜植物组织样本中提取高尔基体。
本试剂盒提取的高尔基体具有完整的活性和功能，可以用于各种下游应用。

组份	50T	100T
试剂A：高尔基体提取液A	50mL	100mL
试剂B：高尔基体提取液B	25mL	50mL
试剂C：试剂WT	1mL	1mL
试剂D：高尔基体保存液	10mL	20mL

保存条件：2～8℃保存，长期-20℃波保存。有效期一年。
注：
● 试剂拆封后请尽快使用完！
● 本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。


移液器，离心机，振荡器，Dounce匀浆器/匀浆机，涡旋混匀器，PBS缓冲液


● 旋帽离心管装试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
● 最好使用Dounce匀浆器匀浆，如果没有Dounce匀浆器，用普通玻璃匀浆器匀浆也可，但是高尔基体回收率会下降。
● 离心机转速有相对离心力（RCF，×g）和每分钟转速（RPM，r/min）两种表示方式，有些离心机设置有RPM和×g显示切换，但部分离心机没有自动切换功能。需要用下面的公式进行换算：
g=r×1.118×10^-5×rpm²（r为有效离心半径，即从离心机轴心到离心收集管底部中心位置的长度，单位为厘米)
例如：转速为3000rpm，有效离心半径为10cm，则相对离心力（RCF，×g）为=10×1.118×10^-5×3000²=1006.2（×g）。

• 取200～500mg新鲜植物叶片组织样本，用PBS洗涤干净。
  
• 用剪刀尽可能剪碎，用冷PBS洗涤两次。
  注：
  ● 也可用刀片将叶片样本切成小块。
  
• 加入500μL～1mL冷的试剂A，置冰上10分钟。
  
• 用匀浆器充分匀浆30～40次。
  注：
  ● 每上下一个来回为一次。
  ● 也可以用电动匀浆机充分匀浆。
  
• 将匀浆液在4℃，1000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，收集上清。
  
• 将上清在4℃，3000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，收集上清。
  
• 将上清在4℃，6000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，收集上清。
  
• 在上清中加入10μL试剂WT，在4℃，50000×g力条件下离心20分钟。
  注：
  ● 没有50000×g离心条件，可以降低离心力。
  ● 如果用大的离心转头，液体量太少不方便离心的话，可以添加PBS增加液体量。
  ● 至少要保证20000×g以上离心力。
  ● 降低离心力后高尔基体回收率会下降。
  
• 弃上清，在沉淀中加入500μL冷的试剂B，混匀。
  
• 在4℃，50000×g力条件下离心30分钟。弃上清，收集沉淀。
  注：
  ● 没有50000×g离心条件，可以降低离心力。
  ● 如果用大的离心转头，液体量太少不方便离心的话，可以添加PBS增加液体量。
  ● 至少要保证20000×g以上离心力。
  ● 降低离心力后高尔基体回收率会下降。
  ● 需要提取高尔基体蛋白时可以直接在沉淀中加入适量蛋白裂解液进行裂解。
  
• 沉淀用高尔基体保存液重悬保存或直接用于下游实验应用。
  注：
  ● 可以不用试剂盒中提供的保存液。
  ● 根据实验需要用自己的其他缓冲液保存或直接用于下游实验。

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